Préparation des échantillons:
Collecte d'échantillons: collectez des échantillons tels que le sang, les tissus, la salive et l'urine en fonction du but de l'expérience.
Extraction d'ADN: utilisez un kit d'extraction d'ADN dédié pour extraire l'ADN de l'échantillon.
Préparation de la réaction de PCR:
Primers de conception: concevoir des paires d'amorces spécifiques basées sur la séquence cible pour l'amplification de l'ADN de matrice.
Préparer le mélange de réaction: y compris l'ADN de la matrice, les amorces, le tampon, l'ADN polymérase, les DNTP (désoxynucléoside triphosphates), mg 2+, etc.
Définir le programme PCR:
Paramètres de l'instrument PCR: Entrez les paramètres du cycle PCR prédéfinis, tels que la température de préchauffage à 95 degrés, la température de dénaturation (telle que 95 degrés), la température de recuit (telle que 55 degrés), la température d'extension (comme 72 degrés) et le nombre de cycles.
Réaction de PCR:
Ajouter l'échantillon: Ajouter le mélange réactionnel au réservoir de réaction de PCR ou à la puce, et chaque échantillon a généralement une bonne réaction.
Effectuer PCR: Les cycles de l'instrument PCR selon le programme Preset, y compris les étapes de chauffage, de refroidissement, de recuit et d'extension.
Analyse des produits:
Refroidissement après amplification: Une fois la PCR terminée, l'échantillon est brièvement refroidi à 4 degrés.
Séparation électrophorétique: utilisez la technologie d'électrophorèse sur gel, telle que l'électrophorèse sur gel d'agarose, pour séparer les produits de PCR de différentes longueurs.
Scanning de fluorescence: les amorces marquées par fluorescence émettent la lumière d'une longueur d'onde spécifique dans le produit amplifié, et l'instrument PCR lit ces signaux et les enregistre.
Traitement et interprétation des données:
Logiciel d'analyse des données: Utilisez un logiciel spécialisé pour analyser le signal fluorescent et calculer la concentration ou la concentration relative du fragment cible.
Interprétation des résultats: Sur la base de la courbe de PCR et de la ligne de base, déterminez si la PCR réussit, si le fragment cible existe et combien il s'agit.
Enregistrement et préservation des résultats:
Enregistrez les résultats dans le rapport expérimental et préservez correctement les données et les échantillons d'origine.